子宮頸癌是全球女性第四大常見惡性腫瘤，也是我國女性癌癥死亡的重要原因。世界衛(wèi)生組織（WHO）提出“加速消除子宮頸癌”全球戰(zhàn)略，強調早期篩查的核心作用。然而，我國篩查覆蓋率不足40%，傳統(tǒng)方法如細胞學檢查和高危HPV（hrHPV）檢測面臨靈敏度低、假陽性率高、主觀依賴性強等瓶頸。在此背景下，DNA甲基化檢測作為新型分子標志物技術，因其在癌前病變和早期癌變中的高特異性與客觀性，成為突破現(xiàn)有篩查困境的重要方向。

檢測技術原理與優(yōu)勢

DNA甲基化是表觀遺傳修飾的重要機制，異常甲基化與腫瘤發(fā)生密切相關。PAX1（配對盒基因1）和JAM3（連接附著分子3）雙基因甲基化（PAX1m/JAM3m）檢測通過分析宮頸脫落細胞中這兩個基因的甲基化水平，實現(xiàn)對宮頸上皮內瘤變（CIN）及癌變的精準識別。

  核心優(yōu)勢：

1. 早期預警：PAX1m/JAM3m水平升高可提示hrHPV持續(xù)感染（持續(xù)3年以上者甲基化水平顯著升高），早于形態(tài)學病變出現(xiàn)。

2. 高靈敏度與分流價值：多中心研究顯示，PAX1m/JAM3m檢測CIN3+的靈敏度達87.6%，診斷CIN2+的靈敏度和特異度分別為74.1%和95.9%。在hrHPV陽性或細胞學ASC-US（意義未明的不典型鱗狀細胞）分流中，可減少57%-79.5%的陰道鏡轉診。

3. 標準化與無創(chuàng)性：基于實時熒光定量PCR（qPCR）的檢測流程可實現(xiàn)實驗室標準化操作，樣本采集便捷，避免侵入性檢查。

檢測全流程技術規(guī)范：

 1. 樣本采集與處理  

采集要求：避免月經(jīng)期、用藥或性生活后24小時內取樣，使用專用宮頸采樣器旋轉刷取脫落細胞。

保存與運輸：樣本需立即置于保存液中，室溫下1周內完成檢測，避免反復凍融導致DNA降解。

 2. 實驗室操作流程  

核酸提?。和扑]磁珠法富集短片段DNA，確保甲基化位點完整性。

重亞硫酸鹽轉化：將未甲基化胞嘧啶轉化為尿嘧啶，需驗證轉化效率（如Sanger測序比對）。

qPCR檢測：設定ΔCt閾值（PAX1/JAM3甲基化陽性判定標準），每批次需包含陰/陽性質控品。

 3. 質控體系  

內部質控：每批次檢測需驗證弱陽性質控品（接近檢測限）、陰性對照及內參基因穩(wěn)定性。

外部質控：參與室間質評，確保實驗室間結果一致性。

失控處理：結果異常時需排查污染、試劑失效或設備誤差，追溯至最后一次有效質控后樣本。

臨床應用場景與管理路徑

 1. 聯(lián)合篩查策略  

hrHPV初篩分流：

HPV16/18陽性且PAX1m/JAM3m陽性：直接轉診陰道鏡。

非HPV16/18型陽性且甲基化陰性：結合細胞學結果（如ASC-US以上轉診，陰性則1年后復查）。

細胞學ASC-US分流：甲基化檢測可替代重復細胞學或HPV檢測，減少79.5%陰道鏡轉診。

 2. 特殊人群管理  

絕經(jīng)后女性：針對宮頸管取樣困難（TZⅢ型轉化區(qū)），甲基化檢測可降低漏診風險。

治療后隨訪：術后持續(xù)PAX1m/JAM3m陽性提示殘留病變或復發(fā)可能。

 3. 報告解讀要點  

陽性結果：提示CIN2+風險，需結合陰道鏡評估，尤其關注TZ不可見病例。

陰性結果：高陰性預測值（>95%）支持延長篩查間隔，降低過度醫(yī)療。

局限性與未來方向

  當前局限：

檢測為定性分析，無法量化甲基化水平與病變程度。

陰道鏡與病理結果不一致時（如甲基化陽性但活檢陰性），需結合TZ分型及多點活檢。

  未來展望：

擴大前瞻性隊列驗證，探索甲基化動態(tài)監(jiān)測在治療反應評估中的應用。

開發(fā)多組學聯(lián)檢模型（如甲基化+突變+蛋白標志物），提升腺癌檢出率。

推動基層標準化檢測能力建設，納入國家宮頸癌篩查公共衛(wèi)生項目。

  總結